Estabilidad del producto hemoclasificador Hemo-CIM® Anti-B: Evaluación durante 2 años / Stability of the Anti-B Hemo-CIM® hemoclassifier product: A 2-year evaluation

Los estudios de estabilidad de los reactivos frabricados a partir de anticuerpos monoclonales de origen murino, permiten establecer adecuadamente la vida de estos productos, y su realización constituye un requisito indispensable en el cumplimiento de las buenas prácticas de producción. Se usaron los métodos de hemaglutinación para medir la actividad biológica del producto Hemo-CIM® Anti-B expresada en la potencia, la avidez y la intensidad, frente a un panel de eritrocitos del grupo B y A1B, para demostrar más efectivamente cualquier deterioro del reactivo. Se estableció que la vida útil del hemoclasificador producido en el Centro de Inmunología Molecular es de 2 años con una temperatura de almacenamiento entre 2 y 8 oC. La evaluación que simula las condiciones a la que los usuarios someten a estos reactivos, demostró que el reactivo mantiene las características de calidad que se requieren para su uso. La estabilidad lograda con el Hemo-CIM® Anti-B es similar a la informada con el producto hemoclasificador monoclonal murino Hemo-CIM® Anti-A.

The stability studies of the reagents made from monoclonal antibodies of murine origin allow to establish the life of these products adequately and are an indispensable requisite for the fulfillment of the good practices of production. The hemagglutination methods were used to measure the biological activity of the Anti-B Hemo-CIMâ product expressed in the potency, avidity and intensity against a panel of erythrocytes of the group B and A1B in order to show in a more effective way any deterioration of the reagent. It was established that the useful life of the hemoclassifier produced at the Center of Mollecular Biology is of 2 years at a storage temperature between 2 and 8ºC. The evaluation that simulates the conditions to which the users subject these reagents showed that the reagent maintains the quality characteristics required for its use. The stability attained with the Anti-B Hemo-CIMâ is similiar to that reported with the murine monoclonal Anti-A Hemo-CIMâ hemoclassifier product.

Reactivo hemoclasificador monoclonal cubano Hemo-Cim anti-A. Estudio de estabilidad / Cuba anti-A Hemo-Cim hemoclassifier monoclonal reagent. Stability study

Los estudios de estabilidad de los reactivos fabricados a partir de anticuerpos monoclonales (AcM) de origen murino, son esenciales para obtener resultados adecuados en su aplicación práctica y constituyen un requisito indispensable en las buenas prácticas de producción, lo que permite establecer adecuadamente la vida de estos productos. Se usaron los métodos de hemaglutinación recomendados para medir la actividad biológica del producto Hemo-CIM anti-A expresada en la potencia, la avidez y la intensidad frente a un panel de eritrocitos del grupo A1 y A2B, que se incluyó por su baja expresión del antígeno A para demostrar más efectivamente cualquier deterioro que sufriera el reactivo. Se estableció que la vida útil del reactivo hemoclasificador producido en el Centro de Inmunología Molecular es de 2 años y se determinó que la temperatura de almacenamiento del producto está entre 2 y 8 ºC. Además, los lotes que se colocaron diariamente en la meseta de trabajo durante 5 horas a 21 ºC a partir del mes 0 y a los 8, 14 y 22 meses después de su producción, simulando las condiciones a la que los usuarios someten a estos reactivos, mantuvieron las características de calidad que se requieren para su uso, lo que demostró que con este producto se puede trabajar en esas condiciones

Descripción de un inmunoensayo enzimático que reconoce anticuerpos anti-factor viii/von Willebrand obtenidos a partir de hibridomas múridos / Description of an enzime immunoassay that recognizes anti-factor viii/von Willebrand antibodies obtained from murine hybridomas

Se describe un inmunoensayo enzimático (ELISA) que detecta anticuerpos anti-Factor-VIII/von Willebrand (FVIII/vW), con una relación de enlace > 5, que permite reconocer dichos anticuerpos tempranamente en los cultivos de hibridomas múridos. Para la adsorción de las placas del inmunoensayo se utilizaron preparados semipurificados de FVIII/vW obtenidos en Cuba. Se inmunizaron ratones Balb/c con la finalidad de generar los anticuerpos monoclonales detectados por este ELISA. Se obtuvo un clon con crecimiento estable y varios subclones positivos por el ELISA con actividad biológica específica de anticuerpos inhibidores de FVIII

Ensayo de terreno de los rectivos hemoclasificadores monoclonales HEMO-CIM anti-A y HEMO-CIM anti-B como productos terminados / Field assay of HEMO-CIM anti-A and HEMO-CIM anti-B monoclonal hemoclassifying reactives as finished products

En Cuba, el registro sanitario de los diagnosticadores está regulado por normas estatales y en el caso de los reactivos hemoclasificadores se exige el ensayo de terreno en comparación con productos similares de calidad reconocida. Se evaluaron los productos terminados Hemo-CIM anti-A y anti-B elaborados en el Centro de Inmunología Molecular/CIMAB S.A., La Habana, en paralelo con los sueros policlonales humanos (MediCuba, La Habana) y con reactivos monoclonales equivalentes (Biotest AG, RFA), mediante un estudio multicéntrico en un servicio de transfusiones, 2 bancos de sangre provinciales y 2 municipales, con 1 130 muestras de sangre, de ellas 202 seleccionadas según criterios específicos de inclusión, por los métodos de hemaglutinación en láminas portaobjeto y centrifugación en tubos. Se encontró una especificidad diagnóstica del 100 porciento y una sensibilidad siempre superior al 99,5 porciento para ambos reactivos. Las opiniones de los posibles clientes sobre calidad, presentación y utilidad de los productos fueron satisfactorias

Fenotipos débiles del antígeno A (sistema ABO de grupos sanguíneos) en donantes de sangre / Weak phenotypes of the A antigen (ABO-group system) in blood donors

El grupo sanguíneo A se subdivide en los subgrupos A1 y A2, sobre la base del número de sitios antigénicos A sobre la superficie del hematíe. Además se han descrito otros fenotipos débiles de este antígeno. Para la determinación de éstos se utilizó la técnica de hemaglutinación con antisueros policlonales y en los casos de aglutinación débil, tardía o de discrepancias con el grupo reverso, se realizó ésta con antisueros anti-A1 y anti-H. Se estudiaron 6 346 donantes de sangre del Banco Municipal "10 de Octubre" durante 5 meses del año 1996: 48,79 porciento fueron del grupo O, 35,15 porciento del A, 12,20 porciento del B y 3,58 porciento del AB. Catorce donantes (0,22 porciento) resultaron A2B, 2 (0,03 porciento) A2BHw, 1 Ael (0,01 porciento) y 1 Aint (0,01 porciento). Las células con estos subgrupos se utilizaron en la confección de un panel para evaluar un anticuerpo monoclonal anti-A producido en el Instituto de Hematología e Inmunología

Frecuencia de los grupos sanguíneos A1, A21, Aint, Ael, B y O en donantes de sangre / Frequency of A1, A2, Aint, Ael, b, and O blood gropus in blood donors

Se estudió la frecuencia de los grupos sanguíneos A1, A2, Aint, Ael, B y O en 2 107 donantes de sangre, clasificados en 1 261 blancos, 569 mestizos y 277 negros. El grupo sanguíneo A1 predominó en los blancos y el fenotipo Ael se identificó únicamente en este grupo racial. Los grupos sanguíneos B y Aint fueron más frecuentes en los negros. En este grupo racial se observó una alta incidencia de fenotipos con deficiencia de sustancia H, que originó un aumento de la frecuencia de los grupos A2 y del A2B en relación con el A1B. El grupo sanguíneo O fue más frecuente en los mestizos en relación con los blancos. Las frecuencias génicas calculadas expresaron resultados similares a los observados en las frecuencias fenotípicas

Incidencia de la deficiencia de sustancia H en los eritrocitos de los grupos A y AB / Incidence of H deficiency in erythrocytes of A and AB groups

Se investigó la deficiencia de sustancia precursora H de los grupos sanguíneos A y AB, en 547 donantes de sangre (397 blancos y 150 negros). Se estimó el rango de puntuación de la aglutinación de un grupo control de 40 donantes, correspondientes a los grupos sanguíneos A1, A2, A1B y A2B. En el suero de los donantes deficientes de H se determinó la presencia de anticuerpos eritrocitarios. En los donantes blancos el grupo A, predominó sobre el A2, de forma contraria ocurrió en los negros. En los 2 grupos raciales estudiados, tanto para el grupo A como el AB, se encontraron variantes deficientes de H codificadas por los genes A1 y A2. En toda la muestra se halló una mayor frecuencia de variantes deficientes A2B, especialmente en los negros. No se observaron anticuerpos anti-H en el suero de las variantes

Interleucina-2 en pacientes con Síndromes Linfoproliferativos / Interleukin-2 in patients with lymphoproliferative syndromes

Se estudió la producción de interleucina-2 (IL-2) en las células mononucleares periféricas de controles normales y de pacientes con sídromes linfoproliferativos. Los valores normales de esta linfocina fueron: 31,74 ñ 18,25 µ/mL. Se encontró elevada en 3 pacientes con leucemia linfoide crónica de células B en estadio clínico III; disminuida en un paciente con linfoma no hodgkiniano y en otro con leucemia de células peludas; y ligeramente baja en pacientes con leucemia linfoide crónica en estadios clínicos O-II. No se encontró correlación entre los valores de IL-2 y la hemoglobina, el conteo global de leucocitos y la administración o no de tratamiento, pero se halló una correlación positiva con el conteo de linfocitos

Utilización de glioblastomas en la obtención de medios condicionados para la generación de hibridomas muridos secretores de anticuerpos monoclonales / Use of glioblastomas in the obtention of conditioned media for the generation of murine hybridomas secreting monoclonal antibodies

Se ha demostrado que las células de glioblastoma humanoproducen interleucemia 6, la cual estimula la proliferación de plasmocitomas secretores de anticuerpos monoclonales. Con el objetivo de obtener medios condicionados se establecieron cultivos primarios de glioblastoma. Estos medios se utilizaron como suplemento en las fusiones de células de mieloma de ratón P3-X63Ag8.653 y esplenocitos de ratones BALB/C hiperinmunes. Se observaron cultivos con una eficiencia de fusión mayor con estos medios condicionados como suplemento, se se compara con aquéllos realizados con capas alimentadoras de macrófagos de la cavidad peritoneal de ratón o sin suplementos. Además ,en los clonajes y reclonajes se usó un clono secretor de anticuerpo monoclonal anti-A, que resultó muy estable, lo que sugiere que es posible obtener un incremento de hibridomas secretores de anticuerpos monoclonales de especificidad deseada en cultivos con factor de crecimiento de hibridoma derivado de glioblastoma

Métodos para el pesquisaje de anticuerpos contra antigenos de grupos sanguineos del sistema ABO humano / Methods for the screeninig antibodies of the human ABO blood group system

Para el pesquisaje inicial de anticuerpos contra antígenos de grupos sanguíneos (tanto en los sueros de ratón como en los sobrenadantes de hibridomas) se utilizó la técnica de aglutinación en microplacas empléandose hematíes A1,A2,Ax, B y O tratados con bromelina. Una vez identificados los clones de hibridomas productores, se estudiaron sus correspondientes líquidos ascíticos por los métodos de aglutinación en microplacas, en tubos por centrifugación y sedimentación y en láminas, lo que permitió demostrar que con el método de pesquisaje inicial se puede procesar un elevado número de muestras y utilizar pequeñas cantidades de sobredonantes, además de que permite seleccionar reactivos adecuados para el fenotipo de grupos sanguíneos en tubos, en láminas y microplacas, que son las 3 técnicas más usadas en el mundo para el inmunofenotipaje de los donantes

Efecto de diferentes sueros y factores de crecimiento en las líneas de plasmacitomas de ratón P3/X-63-Ag8.653 y P3/NS-1/1 Ag 4-1 / Effect of different sera and growth factors in P3/x-63-Ag8.653 and P3/NS'1/1 Ag 4-1 lines of mouse plasmacytomas

Se estudió el efecto de diferentes sueros y medios condicionados en el crecimiento de las líneas X-63 y NS-1. Se utilizaron sueros: fetal bovino, de caballo, de terneros recién nacidos y de condón umbilical humano, a una concentración del 10 por ciento solos o en combinación con 2 por ciento de interleucina-6 o de factor estimulador de colonias no purificados (en medios condicionados). En condiciones de altas densidades celulares se obtuvo la mayor proliferación con el suero de caballo y con el de cordón umbilical y la adición de los factores estimuló preferencialmente el crecimiento de las células NS-1. A bajas densidades celulares se obtuvieron colonias multicelulares, con inóculos iniciales de 5-10 células/pozo, en presencia del suero de caballo o de cordón umbilical y en menor medida con el suero fetal bovino. Las eficiencias de siembre en placas también fueron superiores con ambos sueros

Obtención de factores de crecimiento a partir de medios condicionales: aplicación en cultivos celulares / Otention of growth factors from conditional medium': apllication in cell cultures

Entre las diferentes actividades biológicas de la interleucina-6 se encuentra la inducción de la proliferación de cultivos de hibridomas/plasmacitomas y la estimulación de los progenitores hematopoyéticos pluripotenciales, que alcanza su desarrollo y diferenciación en presencia de otros factores de crecimiento hematopoyéticos. La interleucina-6 y los factores estimuladores de colonias(fracciones dializadas) se obtuvieron a partir de medios condicionados de fibroblastos y de placenta humana, respectivamente. Mediante la proliferación de la líneacelular de mieloma de ratón P-3X63-AG853 se comprobó la acción estimuladora de los medios condicionados de fibroblastos, en especial cuando éstos se trataron con concanavalina A y se obsrvaron agrupaciones celulares(clusters) y colonias en los cultivos de médula ósea humana suplementados con las fracciones de medios condicionados de placenta

Expresión del receptor de interleucina-2 en linfocitos estimulados con mitógeno / Expression of interleukin-2 receptor in mitogen stimulated lymphocytes

Se establecieron las condiciones óptimas para la determinar la expresión del receptor de interleucina-2 en linfocitos normales estimulados con mitógenos mediante el mètodo de inmunofluorescencia indirecta. Se utilizó un anticuerpo monoclonal anti-receptor de interleucina-2 comercial y otro purificado en Cuba. Se encontró una expresión mayor del receptor en los linfocitos cultivados durante 144 horas con fitohemaglutinina a una concentración de 2,5 ug/10 células/mL. Ambos anticuerpos monoclonales marcaron adecuadamente las células. Se hallaron valores normales según las variables óptimas encontradas para el anticuerpo monoclonal purificado en Cuba: de cada 100 células, 26+9 fueron positivas para la expresión del receptor de interleucina-2 al sexto día en cultivo